哈里森
  • “哈里森食物是一种用维生素全面强化了的产品。”
  • —— 格雷格·哈里森(兽医学博士)
鹦鹉类脂肪肝和动脉粥样硬化调查研究中胆固醇测定的重要性

——迈克尔·斯坦福
——兽医学士,英国皇家兽医医学院成员

  本研究报告的主要目的在于明确阐述鹦鹉病鸟的胆固醇正常值范围,来帮助诊断高胆固醇血症和相关并发症如:动脉粥样硬化或脂肪肝(彩图1-4)。并且调查研究不同饲养条件和物种对血胆固醇浓度的影响。在作者的实践中肝脏疾病的临床迹象中需要检测血胆固醇,以估测诊断有效性。


鸟类脂类代谢
  血胆脂醇过多与脂血症、肝病、甲状腺功能减退、胆道梗阻和高脂食物相关。膳食脂肪酸、甘油三酸酯和其他脂类不溶于血浆和其他组织液体中。脂质被运输到全身细胞中作为细胞膜的一部分或者作为脂蛋白复合物存在于血液中。现今已识别鸟类中的四种脂蛋白:门静脉微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。它们的密度是按照超速离心法归类,但是这个过程费用较高,现正在研发测定人类脂蛋白的电泳技术。另外,现在如果知道高密度脂蛋白、胆固醇和甘油三酯的浓度,就可以计算出低密度脂蛋白值。这些公式是物种各异的,在鸟类中还没经过认证。

  肝脏是超低密度脂蛋白胆固醇合成的主要场所。胆固醇在体内主要是两种脂蛋白:高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)。后在肝脏内合成,高密度脂蛋白通过外围组织循环,清除多余的低密度脂蛋白和血管壁上的胆固醇,然后将胆固醇运回到肝脏后续转换成胆汁酸,也就是排泄的一种安全形式。

胆固醇代谢异常
  虽然低密度脂肪酸运输供细胞使用的胆固醇,但是如果人体内的低密度胆固醇过多会导致动脉粥样硬化。概况来说,鸟类中的低密度脂蛋白浓度高也是不正常的,会导致动脉粥样硬化。在最近的107例禽流感尸检中发现,36%的鸟类明显有严重的心血管病变,从组织病理学看99%有心脏病变,这表明目前心脏疾病是非常常见的,还未被确诊,未有禽药医治。笼养鹦鹉的动脉粥样硬化发生率为5.0-12.6%。与哺乳动物相比,鹦鹉患有动脉粥样硬化的有一种基因的因素,非洲灰鹦鹉是最容易患此病的,其次是亚马逊鹦鹉,而葵花和金刚中比较少见。对人类、虎皮和鹌鹑来说,高血浆低密度脂蛋白浓度是患有动脉粥样硬化的一个危险因素,也容易出现在鹦鹉中。

  脂肪肝,或者脂沉积,是鹦鹉类一种常见的综合症,特别是在南美鹦鹉物种中。虽然有报导称患有脂肪肝鹦鹉的血浆总胆固醇浓度高,但是在临床病例中还鲜有关于高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的研究报告。Bavelaar和Beynen证明膳食中的饱和脂肪含量过高会影响灰鹦鹉的血浆胆固醇浓度。研究使用的人工高浓度膳食不适用于日常喂养。减少人类膳食中的饱和脂肪或增加多元不饱和脂肪含量可以改变血浆胆固醇浓度,Bavelaar和Beynen也在灰鹦鹉中证实得到相似结果。使用水溶性纤维,如车前草,可以降低家禽中的血浆胆固醇浓度,但是在灰鹦鹉中却没有相似结果。

肝病调查
  肝病的临床症状并不明确,包括嗜睡、厌食和胆绿素尿(图5)。晚期,鹦鹉会出现腹水、肝肿大和羽毛变色的现象(图6、7),如果不及早诊断可能会有致命的危险,所以进行正确的早期肝组织病理检查是必要的。目前,禽类临床医生需要依靠结合调查技术来做出肝病主要类别的确切诊断。


  根据哺乳动物常规测试,兽医病理学实验室为外来宠物进行大多数的血液化验,但对其他物种无效。虽然血液样品的化学评估能帮助确认肝病,但肝酶浓度变化和肝脏组织病理变化之间好像缺乏一些明显的联系。一些严重的肝病,如黄曲霉毒素中毒,会导致肝脏功能毁灭性的破坏而并没有肝酶升高的现象。虽然血液图谱并不能确定肝脏问题,但也可以为兽医提供重要的信息。特别是,衣原体和其他感染可以通过提高白细胞计数来估测,另外的血液测试(例如:血清学检测)在这些病例中都是必要的。

  胆汁酸测定已被验证是是鸟类肝功能估测的一种方法。在作者的观念中,胆汁酸浓度>100 mmol/L通常是患有明显的肝病,与肝活检中的病理学变化有关。

  诊断性测试还应该包括被麻醉鸟的调查X光片,而且必须定位评估肝的大小。肝的轮廓不能超出通过肩关节虚构的垂直线(图8)。然而,放射照片可能只会显示肝肿大,但并不能作为一个确切的诊断结果。超声波检查法也可以用来估测肝的大小,但是,在作者看来,与放射照片有着同样的局限性(图9)。超声波检查法可用于引导活检技术,但这并没有比内窥镜活检有更明显的优势。


  内窥镜检查法也许最有效的检查肝脏疾病的方法。作者比较偏爱使用标准左横向内窥镜法。进入颅胸气囊,就能看到肝叶,对总变化进行评估。通观肝脏,建议使用腹中线方法,在胸骨弓下方引入内窥镜。用这个方法,也可进行活检(图片10-12)。如果一开始一定要进行肝活组织检查,作者建议从右侧进入最后一根肋骨后面。

  为了收集一个肝活检,在肌肉下面应该要切开一个小口,以便进入到肝脏。肝脏周围有一层薄囊,在活检之前要切开一个小口。在活检过程中要用止血剂控制住肝脏。作者偏好使用血管闭合器来做肝活检,保证止血以及对肝组织破坏降到最小。让经验丰富的鸟类病理学家处理,小型肝活检病理分析是非常有效的诊断工具,也常是获取最终诊断的唯一方法(图13)。


  虽然这是正常的常规检查过程,但出血或腹水流入尾侧气囊是鹦鹉肝活检中可能会出现出的潜在并发症。如果放射X片中证实纤维化或大血管钙化,最大的可能性就是出现动脉粥样硬化,组织病理学上显示为血管纤维化。

方法论
  主要研究的鸟类对象是100只健康的成年非洲灰鹦鹉,这50对都被饲养在室内。所有的鸟都是从同一地方购买,都是从圭亚那野外进口。每一对都被安置在独立砖房以及大小为2m x 2m,内含40cm x 30cm木制巢箱的鸟舍中。所有的鸟舍都被放置在用砖砌成的农场中,石板屋顶无自然紫外线照射。鸟儿以种子粮(Tidymix)为主食,而且没有喂食额外的维生素或矿物质补充。在开始研究之前,鸟儿需在这样的条件下经过24个月人工饲养。

  鸟儿在1998年购买之前都经过标准检测法检查。收集粪便样品进行寄生虫、微生物和革兰氏染色检查。血液样品用于常规血液学和生化分析,并且对圆形病毒、多瘤病毒和衣原体进行PCR测试(聚合酶链反应)。每一只鸟都通过腹腔镜检查来确认它的性别和性成熟阶段,主人还要求,每年都要对鸟儿进行血液样品分析。

  随机抽选40只鹦鹉形成研究小组,再随机按10对雌性和10对雄性分成两组。这些随机抽选的鹦鹉跟剩下的那六十只鹦鹉饲养在同一栋楼房内,条件不变。其中一组喂食颗粒食物(哈里森高营养大颗粒),第二组仍然喂食种子食物。在年度健康检查中,从研究群组中抽取血样,测量胆固醇含量。样品都使用阿尔法·韦士曼湿化学分析仪经过高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酸酯和总胆固醇浓度化验。所有的鸟都在异氟烷麻醉后进行血液取样。

  在另一项研究中,从29只喂食豆类膳食的性成熟健康的派索尼鹦鹉中收集了血液样品,并对上述描述的胆固醇参数进行了分析(图14)。英国的豆类膳食是绿豆、鹰嘴豆、豇豆和扁豆的组合物,经过48个小时浸泡,然后加入苹果/胡萝卜和复合维生素。每只鸟的血液样品都有一式两份,用于统计目的。


  作者实践中列出的所有临床病例,假定有肝脂肪沉积现象,都经过常规血液检查胆固醇含量,还进行了其他诊断测试。这些鸟类的胆固醇水平与主要研究群组得出的正常范围以及肝活检组织病理学诊断结果做比较,来确定胆固醇浓度和组织病理变化之间是否存在联系。

结果对比:
一个具有95%的可信度的独立样本t2测试,用于所有数据分析,以下数据都以mmol/L为单位
表1. 喂食种子粮和脂肪含量为192.2 g/kg总饮食干重的非洲灰鹦鹉测试结果:


表2.进食颗粒膳食和脂肪含量158 g/kg的非洲灰鹦鹉测试结果


表3.喂食豆类膳食和脂肪含量为70.2 g/kg的派索尼鹦鹉测试结果


我们发现派索尼鹦鹉群组的低蛋白胆固醇含量明显高于非洲灰鹦鹉群组。
表4. 临床确诊脂肪肝病例的胆固醇浓度平均值


  与临床正常的派索尼或非洲灰鹦鹉相比,这9只在组织病理学上证实患有脂肪肝的鹦鹉的低蛋白胆固醇明显偏高。

讨论
  这篇研究总结出了食种子粮和颗粒粮的非洲灰鹦鹉体内甘油三酸酯、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的正常值范围。除了膳食中脂肪的含量不同,食用这两组膳食的鹦鹉的胆固醇指数并没有明显差异。虽然在此研究一开始曾怀疑膳食脂肪会影响胆固醇浓度,那个研究中的使用的饱和脂肪浓度仅仅用于调查研究,并不能作为笼养鹦鹉的正常膳食提供。

  但是,从派索尼群组得到的数值与灰鹦鹉群组得到的数值差别还是很大的,这种情况的发生与被喂食低饱和脂肪含量食物的派索尼群组或者喂食非洲灰鹦鹉群组前两种食物并无关系。这表明,人类和鹦鹉的胆固醇代谢有着基因上的不同差异,也可解释为什么一些物种会出现胆固醇新城代谢问题。从传统上看,南美物种在野外进食的食物中含有的脂肪量低,一般是水果。这些不同的差异也表明不同的鹦鹉物种应该根据个体物种的不同喂食特定的食物。

  在所有临床脂肪肝的鹦鹉中,低密度脂蛋白值明显高于临床正常的鹦鹉。在肝活检中也显示,高血浆低密度脂蛋白浓度也与肝活检脂肪肝组织病理学迹象有关。

  根据胆固醇图表来判断临床病例或健康鹦鹉都有助于诊断脂肪肝,甚至可在临床迹象显示出来之前预示有脂肪肝发展的趋势。虽然鸟类物种中的对照研究还必须通过更长远检查正常和异常胆固醇指数范围,我们现在可以指出低密度脂蛋白>3 mmol/L就可视作鹦鹉异常。治疗方法包括纠正膳食或降胆固醇药物。作者现在估测监测低密度脂蛋白值可作为治疗血胆固醇过多的疗效反应。
  由于在这种疾病的早期阶段很难诊断动脉粥样硬化,所以这篇研究不能确定低密度脂蛋白浓度与动脉粥样硬化的关系。

致谢:
  在此特别感谢哈里森国际鸟食的财政支援,还有Nigel Harcourt-Brown兽医(英国皇家兽医外科学会会员)和贝克鸟谷仓提供的灰鹦鹉和派索尼血液样本。

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